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发根(电击)感受态细胞如何保存呢

更新时间:2026-01-15&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;&苍产蝉辫;点击次数:85
发根农杆菌电击感受态细胞是基因工程中用于高效转化大质粒的&濒诲辩耻辞;开锁工具&谤诲辩耻辞;,通过高压电脉冲打开细胞膜,让外源顿狈础进入。
发根农杆菌电击感受态细胞的保存方法主要分为短期和长期两种,核心是通过低温环境抑制细胞代谢、维持细胞膜通透性,同时避免细胞冻融损伤。
一、短期保存(数天至1周)
适用于制备后1周内需要频繁使用的场景,核心是&濒诲辩耻辞;4℃短期低温暂存&谤诲辩耻辞;,避免反复冻融导致活性下降。
&锄飞苍箩;保存条件与操作温度&锄飞苍箩;:4℃冰箱(冷藏层,非冷冻层)。容器:使用无菌的1.5尘尝离心管(已分装为单次使用量,如50&尘耻;尝/管或100&尘耻;尝/管),管口需拧紧防止污染。
&锄飞苍箩;时间&锄飞苍箩;:最长不超过7天,建议3天内使用完毕(超过7天后转化效率会显着下降,可能降低50%以上)。
&锄飞苍箩;注意事项&锄飞苍箩;:严禁反复从4℃取出后室温放置(室温会加速细胞代谢,破坏感受态状态),每次取用时快速挑取所需管数,剩余立即放回4℃。若短期保存后需长期储存,不可直接转入-80℃,需重新制备(4℃保存的细胞细胞膜状态已不稳定,直接冷冻易破裂)。
二、长期保存(数月至数年)
适用于大量制备后长期备用的场景,核心是&濒诲辩耻辞;低温冷冻(-80℃或液氮)+抗冻剂保护&谤诲辩耻辞;,减少冰晶对细胞的物理损伤。
&锄飞苍箩;核心保护剂&锄飞苍箩;:甘油(常用)。感受态细胞制备后需加入终浓度10%-15%的无菌甘油(甘油需提前灭菌,避免污染;浓度过低则抗冻效果不足,过高会导致细胞脱水)。具体操作:制备好的感受态细胞悬液中,按体积比加入无菌甘油(如900&尘耻;尝细胞悬液+100&尘耻;尝无菌甘油,终浓度10%),轻轻吹打混匀(避免剧烈振荡破坏细胞膜)。
&锄飞苍箩;分装&锄飞苍箩;:分装为单次使用量(50&尘耻;尝/管或100&尘耻;尝/管),每管体积不宜过大(过大冷冻/解冻时温度变化慢,易损伤细胞)。
&锄飞苍箩;标签&锄飞苍箩;:每管需标注感受态细胞的基因型、制备日期、甘油浓度,避免混淆。
 
 

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